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    實用干貨 | 如何進行細胞計數實驗?

    發布時間:2023-06-05瀏覽:469次

    細胞計數是細胞培養過程中的重要步驟,“傳統的細胞計數方法"是在顯微鏡下使用血細胞計數板人工計數。這里博大博聚為大家介紹下傳統細胞計數的詳細的步驟,供大家參考。


    1、準備好血細胞計數板

    1)     先用無水乙醇清潔血細胞計數板表面和蓋玻片;

    2)     再用純水清潔血細胞計數板表面和蓋玻片;

    3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

    4)     在血細胞計數板的計數池上方蓋上專用的蓋玻片。

    注意:最好不要擦拭血細胞計數板的計數池,防止標識線損壞。


    2、制備細胞懸液

    1)     貼壁生長的細胞,使用胰酶消化的方法使細胞從培養瓶表面脫落;

    2)     漩渦混勻或使用移液器反復吹吸細胞懸液,盡量減少細胞團簇;

    3)     懸浮細胞則可以直接進行取樣計數;

    4)     細胞懸液濃度控制在1×106個細胞/mL左右。

    注意:

    a)      盡量少、盡量小的細胞團簇;

    b)     如需計算活率,則需將細胞懸液按照1:1的比例加入等量的0.4%的臺盼藍染料,混勻后,靜置1~2分鐘。    



    3、細胞加樣

    1)     移液器輕吹細胞懸液使其混合均勻;

    2)     將細胞懸液與臺盼藍染料按1:1體積混合均勻;

    3)     取出10uL細胞懸液,將細胞懸液滴加于血細胞計數板邊緣凹槽處,此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池。

    加樣-示意圖.jpg


    注意:                                              

    1)     每次加樣前要混勻細胞懸液,防止細胞沉降造成取樣誤差增大;

    2)     加樣過程中,要一次性將細胞懸液注入計數室,防止氣泡產生,否則要重做;

    3)     加樣時不要將細胞懸液直接吹入計數池,會造成細胞分布不均勻。



    4、 人工細胞計數

    計數工具:10X物鏡的顯微鏡、血細胞計數板。

    1)     加樣后,將血細胞計數板靜置數分鐘;

    2)     把血細胞計數板放置在顯微鏡的載物臺進行觀察-計數-記錄;

    3)     分別計數大方格1-2-3-4中的細胞總數。

    血細胞計數板-示意圖.jpg


    注意:

    1)     計數時建議重復1-2次,取平均值,減小計數誤差;

    2)     四個區域的細胞數量偏差不應超過 5%,否則要重新加樣。

    3)     對橫跨刻度上的細胞,依照“數上不數下,數左不數右"的原則進行計數。

    4)    為降低細胞計數誤差,濃度最好控制在1×106個細胞/mL左右;

    5)     計數時,只計數完整的細胞,如有聚團細胞則按一個細胞進行計數。


    5、 血細胞計數板濃度計數標準

    (中國的標準:JJG 552-1988血細胞計數板試行檢定規程)

    細胞計數區域濃度示意圖.jpg

    1)     如上圖所示,當血細胞計數板放上蓋玻片后,平臺與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm;

    2)     平臺中心部分各以3mm長,3mm寬精確劃分為9個大方格,稱為計數室,每個大方格面積為1mm2,體積為 0.1mm3;

    3)     細胞濃度 (mL)=(四個大方格細胞數之和)/4X2(染液稀釋倍數)X 104=?個細胞/mL。


    注意:如果不加入臺盼藍染料,則無需乘以2。

     

    相信有些小伙伴,即使花費很長時間熟悉,并實際接觸細胞計數操作的全部流程后,還是會有結果不滿意、人工操作效率低、結果無法一目了然、細胞計數數到“眼疼"的情況。

    在這里,我向大家推薦一款博大博聚自主研發的、可以使用標準的血細胞計數板的全自動細胞計數儀!


    6、全自動細胞計數儀——JSY-SC-031N型

    細胞計數儀-細胞計數板.jpg

    全自動細胞計數儀(JSY-SC-031N型)是一款一體式明場細胞計數儀,內置10X光學放大系統、全自動調焦裝置、精密的X、Y、Z三軸聯動平臺、強大的細胞識別算法。

    儀器使用標準的血細胞計數板,可實時預覽細胞圖像,將傳統的細胞計數方式可視化、自動化、智能化,為您呈現真實可信的實驗結果。


    7、血細胞計數板上機實拍圖案例

    案例1-球藻細胞圖.jpg案例3-昆蟲細胞圖.jpg

    案例4-BHK細胞.jpg

    8、細胞計數結果包括

    總細胞濃度、活/死細胞濃度、活/死細胞比率、總細胞聚團率/濃度、活細胞聚團率/濃度、死細胞聚團率/濃度等計數結果、原始圖片、識別圖片、柱狀圖、散點圖、等高線圖、報告單等…


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